Use this url to cite publication: https://hdl.handle.net/20.500.12259/56781
Options
Cell electrotransfection and viability dependence on electrotransfection and viability dependence on electoporation medium
Type of publication
Straipsnis Master Journal List / Article in Master Journal List (S2)
Title
Cell electrotransfection and viability dependence on electrotransfection and viability dependence on electoporation medium
Other Title
Ląstelių elektrotransfekcijos ir gyvybingumo priklausomybė nuo elektroporacijos terpių
Is part of
Biologija = Biology. Vilnius : Lietuvos mokslų akademijos leidykla, 2016, vol. 62, nr. 2
Date Issued
Date Issued |
---|
2016 |
Publisher
Vilnius : Lietuvos mokslų akademijos leidykla
Extent
p. 98-104
Field of Science
Abstract
Electroporation is a physical method that uses electric fields to increase membrane permeability. The method is widely used for intracellular drug and gene delivery. In this study we aimed to investigate the importance of the medium for efficiency of cell electrotransfection and viability following the application of electric field pulses. The experiments were performed using 2 different cell lines: Chinese hamster ovary (CHO) and Chinese hamster lung fibroblast (DC-3F) and 2 different electroporation media: SMEM (medium conductivity equal to 1.3 S/m) and laboratory-made low-conductivity (0.1 S/m) electroporation (EP) medium. Cells suspended in these media were supplemented with plasmid (10 µg/ml) encoding luciferase and then were treated with 1, 5, or 10 high-voltage (1200 V/cm, 100 µs, at 1 Hz) pulses. Transfection efficiency was determined by luciferase activity 24 h after cell treatment, while cell viability was determined by clonogenic assay. Results showed significant differences between cell lines and used electroporation media. CHO transfection was higher when electroporation was performed in low conductivity EP medium. Low transfection efficiency in SMEM medium resulted from low viability. In contrast, transfection efficiency of DC-3F cells was higher in SMEM. Possible mechanisms governing these differences are discussed.
Elektroporacija – tai toks fizikinis metodas, kai naudojant elektrinius laukus galima padidinti ląstelių membranos pralaidumą. Elektroporacijos metodas šiuo metu plačiai taikomas vaistų ir genų pernašai į ląsteles ir audinius. Šiame darbe siekėme įvertinti elektroporacijos terpių poveikį ląstelių elektrotransfekcijos efektyvumui ir ląstelių gyvybingumui.Tyrimai buvo atlikti naudojant dvi skirtingas ląstelių linijas: Kininio žiurkėno kiaušidžių ląsteles (CHO) ir Kininio žiurkėno plaučių fibroblastus (DC-3F) bei dvi skirtingas elektroporacijos terpes: SMEM ir laboratorijoje pagamintą žemo laidumo (0,1 S/m) elektroporacijos terpę. Vienoje iš šių terpių paruošta ląstelių suspensija buvo papildyta liuciferazę koduojančia plazmide (10 μg/ml) ir veikta 1, 5 ar 10 aukštos amplitudės (1200 V/cm, 100 μs, pasikartojančios 1 Hz dažniu) elektrinių laukų impulsais. Transfekcijos efektyvumas buvo vertintas pagal liuciferazės aktyvumą praėjus 24 val. po poveikio, o ląstelių gyvybingumas – taikant ląstelių kolonijų formavimo testą.Gauti rezultatai rodo statistiškai patikimus transfekcijos skirtumus tarp ląstelių linijų, priklausančius nuo elektroporacijos terpių. CHO ląstelių transfekcijos efektyvumas buvo didesnis EP terpėje. Žemas šių ląstelių transfekcijos efektyvumas SMEM terpėje yra susijęs su sumažėjusiu šių ląstelių gyvybingumu po jų elektroporacijos SMEM terpėje. Priešingai nei CHO ląstelių atveju, DC-3F ląstelių transfekcijos efektyvumas buvo didesnis SMEM terpėje. Straipsnyje aptariamos galimos šių skirtumų priežastys.
Type of document
type::text::journal::journal article::research article
Language
Anglų / English (en)
Coverage Spatial
Lietuva / Lithuania (LT)
Date Reporting
2017