DNR elektropernašos tyrimai į ląsteles in vitro naudojant aukštos ir žemos amplitudės elektrinius impulsus (Biochemija 04 P)
Anotacija
Šiame darbe buvo tirta DNR elektropernašos efektyvumas į Kininio žiurkėno kiaušidžių ląsteles naudojant aukštos (AA) ir žemos (ŽA) amplitudės elektrinius impulsus. Tyrimų rezultatai parodė, kad mažų molekulių, tokių kaip propidžio jodidas ir didelių molekulių, tokių, kaip plazmidinė DNR, elektropernašos į ląsteles in vitro mechanizmai yra skirtingi. Skirtingai nuo mažų molekulių patekimo, plazmidinės DNR elektropernaša galima tik tuo atveju jei plazmidė ląstelių suspensijoje yra AA impulso taikymo metu. Naudodami AA ir ŽA impulsų kombinacijas, savo tyrimais pirmieji parodėme, kad suspensijoje ir ląstelėms augančioms monosluoksniu, ŽA impulsai po ląstelių elektroporacijos AA impulsu, kai naudota 100 µg/ml plazmidės koncentracija, transfekuotų ląstelių skaičiui įtakos neturi.
Tiriant molekulių patekimą į ląsteles paveikus jas elektriniais laukais pastebėjome, kad kai kurios ląstelės augančios monosluoksniu gali susilieti. Tyrimais nustatėme, kad ląstelių susiliejimas priklauso nuo elektrinio lauko stiprio ir ląstelių linijos. Mūsų in vitro tyrimų rezultatai parodė kad daugiausia ląstelių po elektroporacijos susilieja B16F10 linijoje ląstelėse. Tai patvirtino ir sustiprino ankstesnes hipotezes, kad iš metastazuojančių navikų, ląstelių elektrosusiliejimo kiekis žymiai didesnis, nei normalių ląstelių.
Vertinant ŽA impulso įtaką perneštos DNR kiekiui, nustatėme, kad ŽA impulso įtaka stebima kuomet ląstelių suspensijoje plazmidės koncentracija yra sumažinta (10 µg/ml, 1 µg/ml). Kartu su ankstesniais darbais šie tyrimai leidžia manyti, kad esant sumažintoms plazmidžių koncentracijoms ŽA impulsai ne tik padidina transfekuotų ląstelių skaičių, bet taip pat padidina ir perneštos plazmidės molekulių skaičių transfekuotose ląstelėse
